Beca 2006

FISIOPATOLOGÍA MEDICA:
“LA DISFUNCIÓN ENDOTELIAL EN LA ARTERIOSCLEROSIS”

 

El jurado de selección estuvo integrado por los doctores:
Víctor Pérez, Jorge González Zuelgaray y Eduardo Rousseau.

Fue seleccionado entre los excelentes postulantes 

Curriculum Vitae:   Dr. Federico Pablo di Gennaro

FORMACIÓN

. Médico Facultad de Medicina UBA Diploma de Honor Promedio: 9,20. 1997

. Médico Especialista en Medicina Interna Instituto Universitario CEMIC-UBA. 2001. Ex residente de clínica médica, Departamento de Medicina Interna CEMIC. Rotaciones:

. CEMIC: cardiología, terapia intensiva, infectología, emergencias, ato domiciliaria . FLENI: neurología

. Baylor College of Medicine (Houston, USA): medicina interna. Hospital Alemán: investigación básica en Laboratorio de Medicina Experimental . Hospital Ferrer: Neumonología.

ACTIVIDAD PROFESIONAL: Médico clínico

CEMIC: Médico del Departamento de Medicina Interna.

Instituto Argentino de Diagnóstico y Tratamiento: Médico clínico.

Hospital Alemán: Médico del Centro de Emergencias y del Laboratorio de Medicina Experimental.

ACTIVIDAD-DOCENTE

Instituto Universitario CEMIC: Docente de Práctica Clínica (2002-actual). – Docente de Medicina Interna (2002-actual).

Facultad de Medicina UBA: Docente del Departamento de Fisiología y Biofísica (1994-2002). – Carrera Docente (3° año). Orientación: Medicina Interna (actual).

ACTIVIDAD EN INVESTIGACIÓN

Hospital Alemán: Laboratorio de Medicina Experimental. Director: Prof. Dr. Jorge Toblli Trabajos de investigación básica en curso 2001-actual.

CEMIC: Ganador del subsidio para investigadores jóvenes; “Estudio prospectivo en pacientes hipertensos tratados con Enalapril y dos dosis diferentes de Acido acetilsalicílico”. Otorgado por la Dirección de Investigación 2002.

Asociación Médica Argentina y Fundación Florencio Fiorini: Ganador de la Beca Estimulo Florencio Fiorini para Investigación en Medicina. “Evaluación de angiogénesis en miocardio con enfermedad renal crónica: Rol de las diferentes drogas antihipertensivas”. 2004.

Trabajo de investigación básica publicado sobre: Angiotensin converting enzyme inhibition and angiogenesis in myocardium of obese zucker rats. American Journal Hypertension 2004;17:172-80 y

Dosis elevadas de aspirina disminuyen la natriuresis en pacientes hipertensos tratados con enalapril. Medicina (Buenos Aires) 2004;            64301-305      .

CONGRESOS Y CURSOS

UBA Facultad de Medicina. Escuela de ayudantes de Fisiología. 1993.

Cruz Roja Argentina. UBA Fac. de Medicina. Curso anual de Primeros Auxilios. 1994 UBA Facultad de Medicina. Curso de electrofisiología aplicada. 1994.

UBA Facultad de Medicina. Curso anual de Farmacología para alumnos. 1996.

UBA Facultad de Medicina Curso teórico-práctico, Reanimación. Cardiopulmonar. 1996.

CEMIC. Ciclos de conferencias médicas:

Actualización en Infectología. 1996.

Emergencias Médicas. 1997.

Alteración del Medio Interno. 1997.

Abdomen Agudo. 1997.

Hipertensión Arterial. 1997.

Atención inicial de pacientes traumatizados. 1999.

UBA Facultad de Medicina. n Encuentro de Ayudantes Docentes.1997

Trabajo presentado: Importancia de la actitud docente en el proceso de aprendizaje Congreso Nacional de Residentes de Medicina Interna. Córdoba 1999.

Trabajo presentado: Espondilodiscitis por gérmenes atípicos.

Congreso Nacional de Residentes de Medicina Interna, Mendoza 2000.

Trabajo presentado: Paresia diafragmática por deficit de L-metil carnitil palmitoil transferasa n.

Congreso Nacional de Residentes de Medicina Interna, Mendoza 2000.

Trabajo presentado: Hipertensión arterial y accidente cerebrovascular.

CEMIC Instituto Universitario. Curso de Técnicas de aprendizaje basado en problemas (PBL). 2001.

CEMIC. Curso anual de Medicina Ambulatoria. 2001.

Congreso Nacional de Residentes de Medicina Interna, Santa Fé 2002. Trabajo presentado: Presión de Pulso y compromiso de órgano blanco.

CEMIC. Medicina basada en la evidencia. 2002.

Congreso Argentino de Medicina de Emergencias. 2002.

Congreso Argentino de Neumonología. 2002. .

Miembro titular en el taller de Asistencia respiratoria mecánica. ACLS. Curso de Apoyo Vital Cardiorespiratorio Avanzado. 2003. CEMIC – Programa de Capacitación para la Atención Ambulatoria 2002. CEMIC – Programa de Capacitación para la Atención Ambulatoria 2003. CEMIC – Programa de Capacitación para la Atención Ambulatoria 2004. CEMIC – Programa de Capacitación para la Atención Ambulatoria 2005. Docente disertante: Curso anual de Emergencias para alumnos. Hospital Alemán

2005.

Autor de artículos en la revista del del instituto de investigaciones Cardiológicas “Dr. Taquíni”, 2005.

Autor en la publicación de la Anemia Working Group. Buenos Aires, Argentina 2005.

Director del proyecto de investigación
Prof. Dr. Jorge Eduardo Tobili

A) TÍTULOS UNIVERSITARIOS OBTENIDOS

MEDICO:

Egresado de la Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires el 17 de Diciembre de 1977.

Promedio de calificaciones de la carrera: 8,19 puntos.

DIPLOMA DE HONOR:

Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires. EXP.501.035/81.

Diploma expendido el 22 de Mayo de 1981, registrado en el libro de premios universitarios numero 3 folio 141.

DOCTOR EN MEDICINA:

Tesis de doctorado aprobada el14 de Julio de 1992. Diploma expedido el 14 de Abril de 1993, registrado en el libro general de grados numero: 123 folio 72 , con el numero 3003. Titulo del trabajo de tesis: ALTERACIONES TUBULARES EN NEFROLlTIASIS. Padrino de tesis: Prof. Dr. Juan M. Ghirlanda.

Calificación: SOBRESALIENTE. Trabajo ganador del premio “FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS” 1992. Adjudicado el 28/07/94.

MEDICO ESPECIALISTA EN NEFROLOGÍA y MEDIO INTERNO: Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires.

Carrera finalizada el 14 de Diciembre de 1984. Diploma expedido el14 de Junio de 1985, registrado en el libro general de grados numero 95 folio 71, con el número 5005.

DOCENTE AUTORIZADO EN MEDICINA INTERNA:

Facultad de Medicina, de la Universidad de Buenos Aires. (Exp.506.628/92): Resolución del Consejo Superior de la Universidad de Buenos Aires No. 4191 del 25 de Agosto de 1993.

PROFESOR REGULAR ADJUNTO:

dedicación parcial, Departamento de Medicina, orientación Medicina Interna. Designación aprobada por Consejo Directivo de la Facultad de Medicina, . Exp. 505.559/93 e/agregado anexos 1/15 y por en Consejo Académico de la UBA el17 de Diciembre de 1997. Resolución 6721

CARRERA DE INVESTIGADOR Clínico, Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET) categoría: Adjunto sin Director. Exp. 3451/99 del Consejo Nacional. Resolución D N° 1857. 14 de Junio de 2000.

B) ANTECEDENTES DOCENTES

Año de Iniciación 1982 (Expediente 505.130/82); finalizando los cursos regulares y las obligaciones impuestas el4 de Agosto de 1987.

Examen de idiomas aprobado el 14 de Septiembre de 1982.

idiomas elegidos INGLES e ITALIANO (Expediente 504.291/82).

Examen de Idoneidad en Medicina Interna: tema “ARTRITIS REUMATOIDEA”; aprobado el 28 de Octubre de 1982 (Expediente 504.291/82).

CURSOS DE FORMACIÓN GENERAL PARA ADSCRIPTOS:

-1983: HISTORIA DE LA MEDICINA, Prof. Dr. Argentino Landaburu, Cátedra de Historia de la Medicina: Facultad de Medicina UBA. Aprobado por examen de evaluación el5 de Agosto de 1983.

-1984: HISTORIA DE LA CIENCIA 1, Prof. Dr. Argentino Landaburu, Cátedra de Historia de la Medicina. Facultad de Medicina UBA Aprobado por examen de evaluación el 13 de Septiembre de 1984.

-1985: EPIDEMIOLOGÍA MEDICA, Prof. Dr. Emilio Santabaya, Escuela de Salud publica. Facultad de Medicina UBA Aprobado mediante presentación de monografía el 28 de Junio de 1985.

-1986: BIOESTADÍSTICA, Prof. Dr. José Alonso, Escuela de Salud Publica. Facultad de Medicina UBA Aprobado por examen de evaluación el 3 de Julio de 1986.

-1987: DEONTOLOGÍA MEDICA, Prof. Dr. Victor Poggy,

Cátedra de Medicina Legal y Deontología Medica. Facultad de Medicina UBA Aprobado por examen de evaluación el 4 de Agosto de 1987.

Designación de DOCENTE AUTORIZADO EN MEDICINA INTERNA, Facultad de Medicina, UBA (Exp.506.628/92):

Resolución del Consejo Superior de la Universidad de Buenos Aires No. 4191 del 25 de Agosto de 1993.

C) ANTECEDENTES CIENTÍFICOS CONSIGNANDO LAS PUBLICACIONES U OTROS RELACIONADOS CON LA ESPECIALIDAD

 

BECAS

1-American Society of Nephrology 1997. San Antonio T exas, por el trabajo: “TRANSFORMING GROWTH FACTOR-01AND COLLAGEN TYPE III IN HYPEROXALURIC RATS TREATED WITH ENALAPRIL”.

2- A Estados Unidos USA. Otorgada por el Instituto Internacional de Investigaciones Científicas de la Universidad del Salvador, por haber obtenido el premio al mejor póster Científico en la exhibición permanente del Premio Nobel Prigogine.

Buenos Aires Noviembre 1999.

3-Sociedad Latinoamericana para el Estudio de la impotencia y la Sexualidad (SLAIS). Beca de Investigación Básica al Proyecto: “Evaluación del efecto del citrato de sildenafil solo o asociado con bloqueante del receptor de Angiotensina 11 sobre la remo delación vascular peniana en ratas hipertensas” .

Buenos Aires 20 de Octubre de 2004.

4- Beca “Pfizer” investigación básica en Disfunción Sexual.

Título del Proyecto: Effect of sildenafil cítrate on caveolin-1 and heme-oxygenase expression in cavemous tissue of spontaneous hypertensive rats”.

Mazza ON; Vazquez ES; Toblli JE; Surur DM; Sacca PA; Grosman H.

Otorgada: 28 de Febrero 2005.

LIBROS DE LA ESPECIALIDAD:

COMO COLABORADOR EN CAPÍTULOS:

 

1- “NUEVOS APORTES A LA CLÍNICA y TERAPÉUTICA DE lOS SÍNDROMES DE INFECCIÓN URINARIA”.

Editado por la Sociedad Argentina de Nefrología.

Consejo de INFECCIONES URINARIAS, 1987.

Asesor:

CAPITULO 13 “INFECCIÓN URINARIA ALTA EXTRAHOSPITALARlA”

CAPITULO 18 “INFECCIÓN URINARIA RECURRENTE”.

2- “CAMPBEll, UROlOGIA”. WAlSH P, GITTES R, PERlMUTTER A, STAMEY T. 6ta. Ed. 1994. EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA. BUENOS AIRES.

Colaborador en la corrección de la traducción al español.

TOMO 111. CAPITULO “LITIASIS RENAL”.

3- “BIOlOGIA CELULAR DEL Músculo LISO CAVERNOSO”

Osvaldo N. Mazza y Jorge E. Toblli. Capitulo IX.

En “TRATAMIENTO FARMACOlOGICO DE LA DISFUNCIÓN ERECTll”. Osvaldo N. Mazza & Federico L. Zeller. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires, 1997. 212pp.

4- “BIOlOGIA CELULAR DEL MUSCUlO LISO CAVERNOSO”

Osvaldo N. Mazza y Jorge E. Toblli. Capitulo 1.

En “TRATAMIENTO FARMACOlOGICO DE LA DISFUNCIÓN ERECTll”. 2da. Edición. Osvaldo N. Mazza & Federico L. Zeller. Editorial Médica Panamericana.

Buenos Aires, 1998.

5- ” LITIASIS RENAL. HIPERCAlCIURIAS”

Jorge E. Toblli. Unidad temática 11.

En : “Pronefro” (Programa de Educación Médica Continua a Distancia en Nefrología) Sociedad Argentina de Nefrología. Buenos Aires, 2002. 39-69pp.

COMO AUTOR PRINCIPAL:

1- “LITIASIS RENAL”.

Jorge E. Toblli ,Juan M. Ghirlanda & Carlos Gigler. El ATENEO. Buenos Aires, 1996. 360pp.

ISBN 950-02-0360-X

PREMIOS OBTENIDOS

a) OTORGADOS POR LA FACULTAD DE MEDICINA UBA

1-“DIPLOMA DE HONOR” Facultad de Medicina, UBA

2-“AL ALTERACIONES TUBULARES EN NEFROLlTIASIS”.

Toblli JE.

Premio: “FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS 1992”. Facultad de Medicina. UBA Copia disponible en la biblioteca de la Facultad de Medicina. UBA

3- “EFECTO DEL ENALAPRIL SOBRE EL DAÑO TUBULOINTERSTICIAL EN RATAS HIPEROXALURICAS”

Toblli JE ; Ferder L ; Inserra F.

Premio Bienal: “JUAN MADERA”, 1996. Facultad de Medicina. UBA Copia disponible en la biblioteca de la Facultad de Medicina. UBA

4- “LESIONES TUBULOINTERSTICIALES EN NEFROPATIA LlTIASICA”. Toblli JE; De Rosa G; Angerosa M; Nyberg C; Pagano P.

Premio Bienal: “FRANCISCO ARRILLAGA”, 1996. Facultad de Medicina. UBA Copia disponible en la biblioteca de la Facultad de Medicina. UBA

5- “CUERPOS CAVERNOSOS COMO BLANCO CUERPO CAVERNOSO COMO BLANCO EN HIPERTENSIÓN ARTERIAL”

Autor Principal: Jorge Eduardo Toblli y colaboradores.

Premio Bienal: “LUÍS AGOTE”, 2000. Facultad de Medicina. UBA

Copia disponible en la biblioteca de la Facultad de Medicina. UBA

6. “FACTORES DE PROGRESIÓN DEL DAÑO RENAL CRÓNICO EN NEFRECTOMÍA SUBTOTAL” Prof. Dr. Jorge Toblli; Dra. Graciela De Rosa; Bioq. Margarita Angerosa; Prof. Dr. Osvaldo Mazza, Bioq. Cristina Nyberg.

b) OTORGADOS POR LA ACADEMIA NACIONAL DE MEDICINA Y SOCIEDAD ARGENTINA DE UROLOGÍA

1- “DAÑO TUBULOINTERSTICIAL EN NEUROPATÍA POR ÁCIDO ÚRICO y SU TRATAMIENTO CON CITRATO DE POTASIO”

Toblli JE; De Rosa G; Lago N; Angerosa M; Nyberg C; Pagano P.

Premio: “MARIANO CASTEX”

Academia Nacional de Medicina. 1998

2- Premio: “DOCTOR LUÍS GUEMES” 2002. Facultad de Medicina. UBA Copia disponible en la biblioteca de la Facultad de Medicina. UBA

3- “LA LITIASIS RENAL Y EL DAÑO TUBULAR”.

Toblli JE & Ghirlanda JM.

Premio: “Dr. LUÍS E. PAGLlERE” 1993. SAU. – AMA Copia disponible en la biblioteca de la SAU.

4- “ESTUDIO SOBRE EL COMPROMISO TUBULAR EN LITIASIS RENAL”. Toblli JE; De Rosa G; Angerosa M; Nyberg C; Pagano P.

Premio: “PROF. DR. VICTOR R. MIATELLO”, 1996. S. A N.

Copia disponible en la biblioteca de la SA N.

5- “MODELOS LlTOGENETICOS EXPERIMENTALES”. Toblli JE ; Mazza O ; De Rosa G ; Ghirlanda JM.

Premio: CONGRESO ARGENTINO DE UROLOGIA 1997. Copia disponible en la biblioteca de la SAU.

6- “NEFRECTOMÍAS 5/6 POR ELECTROCOAGULACIÓN”.

Toblli JE; Mazza O; De Rosa G; Ghirlanda JM.

2do. Premio al MEJOR TRABAJO PRESENTACIÓN POSTER: Congreso Argentino de Urología 1997. Copia disponible en la biblioteca de la SAU.

7- “CRISTALURIAS y DAÑO RENAL”

Toblli JE; Stegmuller B; DeRosa G; Angerosa M; Nyberg C; Pagano P.

Premio al MEJOR TRABAJO DE NEFROLOGÍA VII Congreso Nacional de Medicina 1997. Sociedad Argentina de Medicina.

8- “ROL DE LA INHIBICIÓN DEL SISTEMA RENINA-ANGIOTENSINA

EN LA NEFROPATIA POR OXALATO”

Toblli JE; Stella 1; Inserra 1; Ferder F.

Premio: “ALFREDO LANARI”, 1998. Sociedad Argentina de Nefrología (SAN). Copia disponible en la biblioteca de la SA N.

9- “HIPERTENSIÓN ARTERIAL & CUERPOS CAVERNOSOS” Toblli JE Y colaboradores.

Premio: “PRESIDENTE SAU. 2000- AMA

Copia disponible en la biblioteca de la SAU.

d) OTORGADOS POR OTRAS UNIVERSIDADES NACIONALES

1- “ESTUDIO DE LOS MECANISMOS DE PROGRESiÓN EN NEFROPATíAS HUMANAS y EXPERIMENTALES”

De Rosa G; Toblli JE; Cao G; Ibarra R.

Premio: “FLORENCIO FIORINI” 1999 Avances en Nefrología.

Facultad de Medicina Universidad del Salvador.

Copia disponible en la biblioteca de la Biblioteca de la Facultad de Medicina de la Universidad del Salvador.

e) OTORGADOS POR SOCIEDADES CIENTÍFICAS INTERNACIONALES

1- “NEW INVESTIGATOR AWARD 1998”

Toblli JE.

Council For High Blood Pressure Research- American Heart Association.

f) OTORGADOS POR SOCIEDADES MEDICAS NACIONALES.

1- “FACTORES DE PROGRESION DEL DAÑO RENAL CRÓNICO”,

Toblli JE; De Rosa G; Mazza O; Angerosa M; Nyberg C; Domecq P. Premio: “ASOCIACIÓN MÉDICA HOSPITAL ALEMÁN 1999”

Primer Informe

Tema: Disfunción endotelial y arterosclerosis

Objetivos Específicos

Primarios: Evaluar los mecanismos de inflamación y reparación a nivel de la estructura miocárdica en un modelo  animal con disfunción endotelial y arterosclerosis  tratadas con un Inhibidor de la Enzima Convertidora de Angiotensina (IECA), un Bloqueante del Receptor AT1 de Angiotensina II (ARA), la combinación de IECA con ARA y un Calcio Antagonista (CA).

Secundarios: Evaluar posibles diferencias en el control de presión arterial, función renal (clearence de creatinina y proteinuria de 24 hs) y perfil metabólico (hidratos de carbono y lípidos) en los diferentes grupos.

Material y métodos

Se utilizaran ratas macho obesas Zucker (fa/fa) (OZR) de 10 semanas de edad, (Charles River Laboratories, Wilmington, Massachusetts) serán ubicadas en jaulas individuales en un ambiente climatizado a 21 + 2 oC y con un ciclo luz / oscuridad de 12hs (7am-7pm), estas serán separadas en cinco grupos: OZR (G1, n = 8); OZR con Benazepril (B) (G2, n = 8); OZR con Irbesartan (I) (G3, n= 8); O ZR con B + I (G4, n= 8); y OZR con Amlodipina (AML) (G5, n= 8). Todos los animales se alimentarán con alimento standard (16%-18% protein, Cooperación) “ad libitum”. Con el objetivo de obtener un buen control de la presión arterial, se administrarán las dosis recomendadas según estudios previos. Por su parte, una dosis media de B e I será administrada en combinación con el propósito de obtener una cifra equivalente de presión arterial a la de los grupos con dosis completa. Durante seis meses todos los animales serán tratados según el siguiente esquema: G1 agua; G2 con B (10mg/kg/día); G3 con (50mg/kg/día), G4 con B (5mg/kg/día) más I (25mg/kg/día) y G5 con AML  (3mg/kg/día). B, I y AML serán administrados entre 11.00 y 12.00 am. Por sonda gástrica. Semanalmente se ajustará la dosis de cada medicación en cada animal de acuerdo al peso corporal.

Al finalizar el experimento previo ayuno de 14hs. todos los animales serán sacrificados bajo anestesia (pentobarbital 40mg/Kg, inyectado intraperitonealmente), para los correspondientes estudios microscópicos. Oportunamente se obtendrán muestras de sangre para las determinaciones bioquímicas. El corazón de cada rata será cuidadosamente extirpado, luego pesado y fijado en formol buffer al 10% para ser estudiado mediante microscopía óptica e inmunohistoquímica.

Determinación de Presión Arterial

La presión arterial sistólica (PAS) será registrada mensualmente por el método indirecto denominado “tail cuff plethysmography” con el animal consciente ubicado en un restrainer térmico. El procedimiento costará en la colocación de un transductor neumático de pulso en la superficie de la cola del animal distal a la oclusión del manguito para detectar el retorno del latido del pulso luego de la deflación La PAS será así determinada mediante un Pneumatic Pulse Transducer, utilizando un Programmed electro-sphygmomanometer PE-300 (Narco Bio-Systems, Austin, Texas), y el pulso registrado en un Physiograph MK-IIIS (Narco Bio-Systems, Austin, Texas). Un mínimo de tres determinaciones será tomado en cada sesión y la el promedio de estas será informado como PAS.

Procedimientos bioquímicos

La glucemia se determinará por el método de glucosa oxidasa con un Automatic Analyzer (Hitachi 911, Tokyo), mientras que ionograma, colesterol y triglicéridos se determinarán mediante el método estándar. Insulinemia se determinará mediante “two-site immunoassay” con anticuerpo monoclonal en fase sólida (DRG Instruments GmbH, Marburg, Germany). La muestras de suero se almacenaran previamente al estudio como es recomendado. El límite de detección para el test es 0.07 µg/L, calculado por dos DS por encima del cero standard.

Procesamiento cardíaco y examen histológico

Los corazones serán perfundidos con solución salina a través de la aorta abdominal. Luego los corazones serán extirpados, pesados y disecados para remover el ventrículo izquierdo unido al septum interventricular. Los fragmentos serán fijados en formaldehído buffer fosfato 10% (pH 7.2) e incluidos en parafina (Paraplast) para el estudio microscópico. Se cortarán secciones de tres micrones para luego ser coloreadas con hematoxilina-eosina (H&E) y tricromico de Masson.

Inmunohistoquímica

Luego de desparafinar las secciones histológicas con técnica de rutina se tratarán con una proteína bloqueante, (Immunotech, Ultratech, France); se incubarán con el primer anticuerpo específico. A continuación se realizarán lavados con PBS-Triton y posteriormente se harán incubaciones durante 30 minutos con un anticuerpo secundario “Polyvalent biotinylated antibody”, (Immunotech, Ultratech HRP kit, France). Se realizarán dos lavados de 10 minutos con PBS-Triton; se incubarán durante 30 minutos con un anticuerpo terciario “Streptavidin-peroxidase, (Immunotech, Ultratech HRP kit, France). Se realizarán dos lavados de 10 minutos con PBS. Para revelar se utilizará el cromógeno DAB (3,3´-Diamino-benzidine, Sigma) en PBS y agua oxigenada al 30%, durante 5 minutos. Se lavarán dos veces con agua destilada y se colorearán posteriormente con hematoxilina durante 3 minutos. Se lavarán con agua y luego con carbonato de litio para producir el viraje al color azul. Se deshidratarán utilizando soluciones crecientes de alcohol. Se aclararán con xilol y se montarán sobre un portaobjetos utilizando un bálsamo adherente.

Con el propósito de evaluar la densidad del músculo liso vascular y la identificación de miofibroblastos intersticiales se empleará un anticuerpo anti-?-actina de músculo liso, (BioGenex ) en una dilución 1:100-1:200. Además se cuantificará el colágeno tipo I y tipo III con los anticuerpos correspondientes (anti-Collagen Type I y anti–Collagen Type III (BioGenex) en una dilución 1:100 respectivamente. Con el objetivo de evaluar el desarrollo del proceso fibrótico se cuantificará la expresión de Transforming Growth Factor-ß? (TGF-ß1?? mediante anti-TGF ß1 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA), en una dilución 1:100. La expresión de la óxido nítrico sintetasa endotelial (eNOS), será estudiada utilizando un anticuerpo policlonal IgG de conejo anti-eNOS (sc-653, NOS3; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA) en una dilución 1:100. Finalmente se determinará el plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) en tejido cardíaco mediante anticuerpo policlonal IgG de conejo anti-rata (American Diagnostica, Greenwich, CT) en una dilución 1:100.

Análisis morfométrico

Todas las observaciones serán efectuadas utilizando un foto-microscópio de luz Nikon E400 (Nikon Instrument Group, Melville, New York. USA) y una cámara digital Nikon Coolpix 4500 (Nikon Corporation, Tokyo, Japan).

Las muestras de tejido cardíaco serán evaluadas tomando las imágenes de veinte campos microscópicos consecutivos a una magnificación de 400x (cada campo representa 1.13 mm2), El total del área cardíaca explorada será de 22.6 mm2) en cada muestra de cada rata. Luego todas las imágenes serán transferidas a una PC y utilizando un analizador de imágenes, Image-Pro Plus ver. 4.5 for Windows (Media Cybernetics, LP. Silver Spring, MD, USA). Se procederá a la medición y cuantificación de las respectivas inmunomarcaciones. Se procederá a la determinación de la densidad numérica de miocitos y capilares miocárdicos así como la relación pared-lumen en los vasos coronarios en cada grupo. Finalmente todos estos datos serán promediados para obtener el resultado final de cada grupo. En cada corazón la inmunomarcación positiva para PAI-1, TGF-ß1, COL I y COL III, será expresada como porcentaje sobre área de 22.6 mm2, mientras que el TGF-ß1 intersticial será expresado como el número de células positivas para TGF-ß1 / mm2.

Métodos estadísticos

Los valores se expresarán como media ± DS. Todos los cálculos del análisis estadísticos serán procesados con el programa Instat, versión 3.0 (GraphPad Software, Inc., San Diego, California, USA). El método de Kolmogorov & Smirnov se empleará como test para determinar si la distribución de las muestras era “Gaussiana” en los distintos parámetros evaluados. Para variables con distribución Gaussiana, las diferencias entre los valores de las medias, serán evaluadas por ANOVA y seguido del test de comparación múltiple de Tukey-Kramer. El análisis estadístico de las variables como los datos histológico que presentan una distribución no-Gaussiana será realizado utilizando el test no paramétrico de Kruskal Wallis y el test de comparación multiple de Dunn. Los coeficientes de Spearman o de Pearson serán empleados para determinar la correlación lineal entre los diferentes parámetros medidos. El valor de p< 0,05 será considerado como significativo.

Resultados

Luego del período operatorio y durante el transcurso del experimento, al cabo del sexto mes, no se agregó mortalidad en ningún grupo de los animales estudiados (ratas Zucker). En relación a la evolución de la presión arterial sistólica (PAS) a lo largo del estudio se pudieron apreciar diferencias significativas entre los animales sin tratamiento, y el resto de los grupos con los diferentes antihipertensivos (figura 1). El método utilizado para el registro de la Presión Arterial se ilustra con la foto 1.

Con respecto a la proteinuria, mientras los grupos que recibieron placebo y Amlodipina presentaron en forma similar proteinuria creciente durante el desarrollo del experimento, los grupos con Benazepril y/o Irbesartan mostraron un control significativo de la excreción urinaria de proteínas (figura 2). La forma de administración de los diferentes fármacos de ilustra en la foto 2.

En relación a la función renal, evaluada mediante el clearance de creatinina, se pudo observar claramente que todos los grupos tratados con Benazepril y/o Irbesartan presentaron cifras significativamente mayores (p< 0.01) que las observadas en los grupos sin tratamiento y con Amlodipina (figura 3).

Los posibles mecanismos fisiopatológicos que fundamentan estos resultados son los siguientes:

–         Las drogas de dos clases diferentes pueden diferir en la duración e intensidad de sus efectos, lo que permitiría aumentar o prolongar la respuesta.

–         El uso de IECA asociado a ARA II aumenta la producción de bradikininas, causando un efecto vasodepresor que se suma al bloqueo del AT1, produciendo una acción antihipertensiva, antiiflamatoria y antifibrótica adicional.

–           El uso exclusivo de ARA II para el bloqueo del receptor AT1 impide la acción del escape de Ang II generada por vía alternativa a la enzima convertidora, pero también posibilita la sobre producción compensadora de Ang II, que puede ejercer efectos nocivos, a través de la unión con receptores diferentes del AT1.

Conclusiones

Con los datos obtenidos hasta el momento podemos concluir que a pesar de mantener una presión arterial controlada por igual en todos los grupos tratados (figura 1), sólo aquellos con bloqueo del sistema renina angiotensina (SRA) se vieron favorecidos en relación al control de la proteinuria (figura 2) y preservación de la función renal (figura 3) en este modelo animal con síndrome metabólico (rata Zucker obesa, foto 3). Es importante destacar que en el grupo que fue tratado con una inhibición doble del SRA (Benazepril + Irbesartan), se observó una mayor nefroprotección.

Por tal motivo se puede considerar este trabajo de investigación básica con una importante aplicación clínica por la gran prevalencia y repercusión de esta enfermedad en la actualidad.

En el próximo informe describiré los aspectos morfométrico-histológicos y la correspondiente inmunohistoquímica de los respectivos grupos como fue detallado previamente.  

INFORME FINAL

PROPUESTA DE TRABAJO

Antecedentes del conocimiento sobre el tema y fundamento del estudio

La arteriosclerosis es una enfermedad inflamatoria sistémica, progresiva y heterogénea que produce un gran impacto en la morbimortalidad por eventos cardiovasculares. Desde el punto de vista fisiopatológico está directamente relacionada con un conjunto de factores de riesgo que conforman el síndrome metabólico (SM) [1,2]. En la actualidad, el SM es una entidad clínica muy prevalente y está conformado por obesidad, diabetes, dislipemia e hipertensión arterial. Es un hecho conocido que pacientes con SM presentan una mayor morbimortalidad por eventos cardiovasculares secundarios a la disfunción endotelial y arteriosclerosis [2,3].

Modificaciones histopatológicas a nivel del miocardio como hipertrofia de cardiomiocitos, engrosamiento de la pared arteriolar, disminución del número de capilares y aumento de la fibrosis intersticial han sido documentado en ratas obesas Zucker, un reconocido modelo animal con SM, disfunción endotelial y arteriosclerosis coronaria y renal [3,4].

En los últimos tiempos una creciente información sugiere que el sistema renina- angiotensina (SRA) se encuentra profundamente involucrado en la patogénesis de la disfunción endotelial y la enfermedad arterioesclerótica en el SM [5,6].

Por otra parte los fármacos que modulan el SRA proporcionarían un efecto terapéutico protector y reparador del daño endotelial y tisular que se observa durante la evolución de esta enfermedad [7-9].

Recientemente Toblli y col. comunicaron que los Inhibidores de la Enzima Convertidora de Angiotensina (lECA) estimularían la angiogénesis en el miocardio de ratas obesas Zucker a través del mecanismo vía bradikinina- óxido nítrico. De esta manera se podría mejorar la disfunción endotelial y la rarefacción capilar observada como enfermedad de la microcirculación en el tejido miocárdico [10].

Si bien estudios utilizando ratas espontáneamente hipertensas (SHR) tratadas con Streptozotocina, con el objetivo de desarrollar un modelo animal de hipertensión arterial y diabetes insulino deficiente (tipo 1), han demostrado el beneficio de la administración simultánea de un lECA junto a un Bloqueante del Receptor A T1 (ARA) en la protección de hipertrofia ventricular izquierda [11], hasta el momento no se registran datos empleando esta terapéutica en modelos animales con disfunción endotelial y arteriosclerosis como el de la rata Zucker.

Por tal motivo el aporte de nuevos experimentos utilizando combinación de fármacos (lECA + ARA) en un mismo tratamiento que ejerzan un mejor control sobre el SRA adquiere importancia, no sólo en la protección miocárdica sino también en el control metabólico.

Teniendo en cuenta la elevada morbimortalidad por eventos cardiovasculares en la población con SM, corregir las modificaciones miocárdicas secundarias a la disfunción endotelial y arteriosclerosis a través de un tratamiento farmacológico combinado implicaría un gran beneficio con aplicación clínica.

OBJETIVOS E HIPOTESIS

Objetivos Generales

Destacar el posible efecto de la doble inhibición del SRA en relación a las modificaciones de la estructura miocárdica en un modelo de rata obesa con disfunción endotelial y arteriosclerosis (Síndrome Metabólico).

Por tal motivo se puede considerar este proyecto como un verdadero aporte para una mejor comprensión de los posibles mecanismos de protección cardiaca y algún beneficio secundario al mejor control metabólico en una situación mórbida donde convergen al mismo tiempo un conjunto de factores – de riesgo para el desarrollo de disfunción endotelial y arteriosclerosis (obesidad, diabetes, hiperinsulinemia e insulino resistencia, dislipidemia, e hipertensión arterial).

Una mayor protección cardiovascular en los pacientes con SM mediante la adecuada utilización de drogas podría reducir las complicaciones que estos enfermos presentan con el consecuente beneficio para ellos y un menor gasto futuro en estudios, internaciones y cirugía cardiovascular.

Objetivos Específicos

Primarios:

Evaluar los mecanismos de inflamación y reparación a nivel de la estructura miocárdica en un modelo de rata con disfunción endotelial y arteriosclerosis . tratadas con un Inhibidor de la Enzima Convertidora de Angiotensina (lECA), un Bloqueante del Receptor A T1 de Angiotensina 11 (ARA), la combinación de lECA con ARA y un Calcio Antagonista (CA).

Secundarios:

Evaluar pósibles diferencias en el control de presión arterial y perfil metabólico (hidratos de carbono y lípidos) en los diferentes grupos.

Material y métodos

Se utilizaran ratas macho obesas Zucker (faifa) (OZR) de 10 semanas de edad, (Charles River Laboratories, Wilmington, Massachusetts) serán ubicadas en jaulas individuales en un ambiente climatizado a 21 +/- 2 °C y con un ciclo luz /oscuridad de 12hs (7am-7pm), estas serán separadas en cinco grupos: OZR (G1, n = 8); OZR con Benazepril (B) (G2, n = 8); OZR con Irbesartan (1) (G3, n= 8); O ZR con B + I (G4, n= 8); y OZR con Amlodipina (AML) (G5, n= 8). Todos los animales se alimentarán con alimento standard (16%-18% protein, Cooperación) “ad libitum”. Con el objetivo de obtener un buen control de la presión arterial, se administrarán las dosis recomendadas según estudios previos. Por su parte, una dosis media de B e I será administrada en combinación con el propósito de obtener una cifra equivalente de presión arterial a la de los grupos con dosis completa. Durante seis meses todos los animales serán tratados según el siguiente esquema: G1 agua; G2 con B (10mg/kg/día); G3 con I (50mg/kg/día), G4 con B (5mg/kg/día) más I (25mg/kg/día) y G5 con AML (3mg/kg/día). B, I Y AML serán administrados entre 11.00 y 12.00 amo Por sonda gástrica. Semanalmente se ajustará la dosis de cada medicación en cada animal de acuerdo al peso corporal.

Al finalizar el experimento previo ayuno de 14hs. todos los animales serán sacrificados bajo anestesia (pentobarbital 40mg/Kg, inyectado intraperitonealmente), para los correspondientes estudios microscópicos. Oportunamente se obtendrán muestras de sangre para las determinaciones bioquímicas (glucemia, insulinemia, colesterol, triglicéridos, ionograma, hematocrito). El corazón de cada rata será cuidadosamente extirpado, luego pesado y fijado en formol buffer al 10% para ser estudiado mediante microscopía óptica e inmunohistoquímica.

Determinación de Presión Arterial

La presión arterial sistólica (PAS) será registrada mensualmente por el método indirecto denominado “tail cuff plethysmography” con el animal consciente ubicado en un restrainer térmico. El procedimiento costará en la colocación de un transductor neumático de pulso en la superficie de la cola del animal distal a la oclusión del manguito para detectar el retorno del latido del pulso luego de la deflación La PAS será así determinada mediante un Pneumatic Pulse Transducer, utilizando un Programmed electro-sphygmomanometer PE-300 (Narco Bio-Systems, Austin, Texas), yel pulso registrado en un Physiograph MK- IIIS (Narco Bio-Systems, Austin, Texas). Un mínimo de tres determinaciones será tomado en cada sesión y la el promedio de estas será informado como PASo

Procedimientos bioquímicos

La glucemia se determinará por el método de glucosa oxidasa con un Automatic Analyzer (Hitachi 911, Tokyo) , mientras que ionograma, colesterol y triglicéridos se determinarán mediante el método estándar. Insulinemia se determinará mediante “two-site immunoassay” con anticuerpo monoclonal en fase sólida (DRG Instruments GmbH, Marburg, Germany). La muestras de suero se almacenaran previamente al estudio como es recomendado. El límite de detección para el test es 0.07 g/L, calculado por dos DS por encima del cero standard.

Procesamiento cardíaco y examen histológico

Los corazones serán perfundidos con solución salina a través de la aorta abdominal. Luego los corazones serán extirpados, pesados y disecados para remover el ventriculo izquierdo unido al septum interventricular. Los fragmentos serán fijados en formaldehído buffer fosfato 10% (pH 7.2) e incluidos en parafina (Paraplast) para el estudio microscópico. Se cortarán secciones de tres micrones para luego ser coloreadas con hematoxilina-eosina (H&E) y tricromico de Masson.

Inmunohistoquímica

Luego de desparafinar las secciones histológicas con técnica de rutina se tratarán con una proteína bloqueante, (Immunotech, U Itratech , Franca); se incubarán con el primer anticuerpo específico. A continuación se realizarán lavados con PBS- Triton y posteriormente se harán incubaciones durante 30 minutos con un anticuerpo secundario “Polyvalent biotinylated antibody”, (Immunotech, Ultratech HRP kit, France). Se realizarán dos lavados de 10 minutos con PBS- Triton; se incubarán durante 30 minutos con un anticuerpo terciario “Streptavidin-peroxidase, (Immunotech, Ultratech HRP kit, France). Se realizarán dos lavados de 10 minutos con PBS. Para revelar se utilizará el cromógeno DAB (3,3′-Diamino-benzidine, Sigma) en PBS yagua oxigenada al 30%, durante 5 minutos. Se lavarán dos veces con agua destilada y se colorearán posteriormente con hematoxilina durante 3 minutos. Se lavarán con agua y luego con carbonato de litio para producir el viraje al color azul. Se deshidratarán utilizando soluciones crecientes de alcohol. Se aclararán con xilol y se montarán sobre un portaobjetos utilizando un bálsamo adherente.

Con el propósito de evaluar la densidad del músculo liso vascular y la identificación de miofibroblastos intersticiales se empleará un anticuerpo anti-a-actina de músculo liso, (BioGenex) en una dilución 1:100-1:200. Además se cuantificará el colágeno tipo I y tipo III con los anticuerpos correspondientes (anti-Collagen Type I y anti-Collagen Type III (BioGenex) en una dilución 1:100 respectivamente. Con el objetivo de evaluar el desarrollo del proceso fibrotico se cuantificará la expresión de Transforming Growth Factor-?1 (TGF? mediante anti-TGF (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA), en una dilución 1:100. La expresión de la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS), será estudiada utilizando un anticuerpo policlonal IgG de conejo anti-eNOS (sc-653, NOS3; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA) en una dilución 1:100. Finalmente se determinará el plasminogen activator inhibitor-1 (P AI-1) en tejido cardíaco mediante anticuerpo policlonal IgG de conejo anti-rata (American Diagnostica, Greenwich, CT) en una dilución 1 :100.

Análisis morfométrico

Todas las observaciones serán efectuadas utilizando un foto-microscópio de luz Nikon E400 (Nikon Instrument Group, Melville, New York. USA) y una cámara digital Nikon Coolpix 4500 (Nikon Corporation, Tokyo, Japan).

Las muestras de tejido cardíaco serán evaluadas tomando las imágenes de veinte campos microscópicos consecutivos a una magnificación de 400x (cada campo representa 1.13 mm2), El total del área cardíaca explorada será de 22.6 mm2) en cada muestra de cada rata. Luego todas las imágenes serán transferidas a una PC y utilizando un analizador de imágenes, Image-Pro Plus ver. 4.5 for Windows (Media Cybernetics, LP. Silver Spring, MD, USA). Se procederá a la medición y cuantificación de las respectivas inmunomarcaciones. Se procederá a la determinación de la densidad numérica de miocitos y capilares miocárdicos así como la relación pared-Iumen en los vasos coronarios en cada grupo. Finalmente todos estos datos serán promediados para obtener el resultado final de cada grupo. En cada corazón la inmunomarcación positiva para PAI-1, TGF? COL I Y COL III, será expresada como porcentaje sobre área de 22.6 mm2, mientras que el TGF? intersticial será expresado como el número de células positivas para TGF? mm2.

Métodos estadísticos

Los valores se expresarán como media +/- DS. Todos los cálculos del análisis estadísticos serán procesados con el programa Instat, versión 3.0 (GraphPad Software, Inc., San Diego, California, USA). El método de Kolmogorov & Smirnov se empleará como test para determinar si la distribución de las muestras era “Gaussiana” en los distintos parámetros evaluados. Para variables con distribución Gaussiana, las diferencias entre los valores de las medias, serán evaluadas por ANOV A y seguido del test de comparación multiple de Tukey-Kramer. El análisis estadístico de las variables como los datos histológico que presentan una distribución no-Gaussiana será realizado utilizando el test no parametrico de Kruskal Wallis y el test de comparación multiple de Dunn. Los coeficientes de Spearman o de Pearson serán empleados para determinar la correlación lineal entre los diferentes parámetros medidos. El valor de p< 0,05 será considerado como significativo.

Resumen

El síndrome metabólico (SM), conformado por obesidad, diabetes, dislipemia e hipertensión arterial, está principalmente vinculado al compromiso del aparato cardiovascular y se caracteriza por presentar disfunción endotelial y arteriosclerosis. Un hecho conocido es que pacientes con SM presentan mayor morbimortalidad por eventos cardiovasculares. El objetivo del presente estudio es evaluar los mecanismos de inflamación y reparación a nivel de la estructura miocárdica en un modelo de rata con disfunción endotelial y arterioesclerosis tratadas con un Inhibidor de la Enzima Convertidora de Angiotensina (IECA), un Bloqueante del Receptor AT1de Angiotensina II (ARA), la combinación de lECA con ARA y un Calcio Antagonista (CA). Además, valorar posibles diferencias en el perfil metabólico en los diferentes grupos.

El experimento consiste en estudiar cinco grupos de ratas, macho obesas Zucker (faifa) (OZR): OZR (G1, n = 8); OZR con Benazepril (B) (G2, n = 8); OZR con Irbesartan (1) (G3, n= 8); OZR con B + I (G4, n= 8); y OZR con Amlodipina (AML) (G5, n= 8). Recibirán durante seis meses: G1 agua; G2 con B (10mg/kg/día); G3 con I (50mg/kg/día), G4 con B (5mg/kg/día) más I (25mg/kg/día) y G5 con AML (3mg/kg/día). Al finalizar el estudio previo a la obtención de muestras de sangre para determinaciones bioquímicas todos los animales serán sacrificados para los correspondientes estudios microscópicos e inmunohistoquímicos.

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