Beca 2005/2006

Tema propuesto:
“Neurociencias: Fronteras de la investigación neurobiológica”.

El jurado de selección estuvo integrado por los doctores:

Jorge Insúa, Rodolfo Fahrer, León Turjanski, Hermes Becerra y Ángel Alonso, como titulares y como suplentes: Félix Etchegoyen y Armando Mendizábal.

Fueron seleccionados las siguientes postulantes:

  • Dra. María Cecilia Vanzani
  • Dra. María Elina Grecco

Nota: Posteriormente a la selección, la Dra. Grecco, declinó la beca otorgada por razones personales el 7 de diciembre de 2005.

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De la becaria Maria Cecilia Vanzani

I. DATOS PERSONALES

Apellido: VANZANI. Nombre: MARIA CECILIA
Lugar de Trabajo: Laboratorio de Neurovirología, Departal e Microbiología, Facultad de Medicina-UBA,

ANTECEDENTES ACADÉMICOS

1. Ciencias Biomédicas

1.1. Título de Grado

Médica, Facultad de Medicina. Universidad de Buenos Aires. Fecha de graduación: 16/12/1999. Promedio de la carrera: 7,30.

2. Doctorado de la Universidad de Buenos Aires

En curso. Plan de trabajo aprobado el 15/03/2001 (res. 140), Consejo Directivo, Facultad de Medicina-UBA, para desarrollar el tema: “Caracterización temporoespacial de la activación astrocitaria en la Enfermedad de Alzheimer versus envejecimiento normal”, bajo la dirección de la Prof Dra. María L. Berría. Ya en etapa de finalización. con proyectada entrega de ejemplares para Mayo 2005.

3. Pasantías, cursos y asignaturas complementarios al .doctorado.

Por indicación de Comisiones de Doctorado y de Investigación, Facultad de Medicina-UBA.

– Citogenética, pasantía, en División Citogenética, Hospital de Clínicas “José de San Martín”, Buenos Aires, Mayo-Agosto / 200 l.

– Bioestadística, VI Curso para Tesistas, Instituto de Metodología y Sociedad Argentina de Neurobiología, Buenos Aires, Fundación Instituto de Neurobiología, Junio-Diciembre/2001, con evaluación final.

– Inmunohistoquímica. cursada regular de asignatura. en Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA. Agosto-Diciembre/200l, con evaluación final teórica y práctica. (08/03/02).

Especialización en Psiquiatría.

Avalada por Secretaría de Salud del Gobierno Autónomo de la Ciudad de Buenos Aires.
Concurrencia completa 19 Mayo 2005, en que concluiría capacitación (2000-2005). Hospital Psicoasistencial interdisciplinario J. T. Borda (ver ítem 1.8)

4. Exposición del trabajo realizado.

Madrid, Octubre 21-2005

Desde mi llegada al país anfitrión y luego se sortear felizmente algunos inconvenientes, propios del arribo, logré rápidamente una adaptación que está favoreciendo el rendimiento de mi trabajo en la Institución asignada. Esas tareas fueron iniciadas el pasado lunes 4 de Julio, consecutivamente a mí llegada Madrid el anterior sábado 2.
Desde mi arribo he participado en actividades de Rotary, como menciono en el documento correspondiente. Entre e1la fui conferencista invitada al Club Majadahonda (Madrid) en ocasión de la reunión que tuvo lugar el 08-09-05, en que ante la audiencia rotariana y algunos invitados expuse el motivo de mi estancia en este país, desarrollé el proyecto que llevaría a cabo en el Instituto Cajal, destacando consideraciones teóricas que tal trabajo implica. Ello suscitó una gran variedad de preguntas, tanto referidas al contexto de la exposición como en tomo a mi formación persona1 y profesional) intereses, inquietudes, proyectos y expectativas. En suma resultó un fructífero intercambio de ideas, coronado en cierta forma por la distinción que para mí significó firmar el libro de conferencistas invitados. En ocasión de esa. cena de presentación y bienvenida, he tenido la oportunidad de conocer los miembros del Club y en particular a su Presidente y al Gobernador del Distrito.
En respuesta a una invitación de una invitación realizada por mi consejera anfitriona, la Sra. Herminia Peralta, he realizado una presentación como integrante de una mesa redonda, la que se llevó a cabo en la Facultad de Psicología de la UNDS. Se trataba de una actividad desarrollada en el marco de] proyecto de investigación que la Sra. Peraita encabeza y que se refiere a la detección precoz de la demencia.
Dado el ámbito tan cosmopolita del laboratorio en donde desempeño mi actividad, cuento con compañeros de los mas diversos países, tales Portugal, EEUU, México, Japón, etc. lo que me está permitiendo un intercambio cultural muy interesante y un espacio en donde poder llevar a cabo mi tarea. como embajador de buena voluntad.
En cuanto a mi vida en Madrid, es ciudad que ofrece tantos y variados sitios de interés cultural. Pese al escaso tiempo libre que me permiten 1as actividades que cumplo en el Instituto Cajal, ya he podido visitar museos como El Prado, Reina Sofía y Thyssen, a más de otros centros tales como ser los Sitios Reales. En suma, que al perfeccionamiento científico que estoy adquiriendo, se agrega la posibilidad de ampliar mis intereses extra-profesionales, y todo ello posibili1ado por la presente beca.
En los últimos años ha quedado establecido que los esteroides provenientes de la periferia o sintetizados localmente (neuroesteroides) ejercen multitud de efectos, tanto en el Sistema Nerviosos Central (SNC) como en el Periférico (SNP). La presencia de una maquinaria sintética propia siguiere que la función de los esteroides en el SN va más allá de la regulací6n de procesos reproductivos y sexuales.
Dentro de este marco se plantea la relación de 1as sustancias de naturaleza esteroides y la función nerviosa. y es por ello que intentaremos analizar los cambios que producen factores tales como el stress y el ejercicio sobre la neurogénesis así como las modificaciones en la expresión de aquellas proteínas implicadas en dicho proceso.
La importancia de los efectos del Litio en la Psicofarmacología y en las vía de acción intermedia tampoco está claramente establecida, justificando en consecuencia una hipótesis de trabajo tendiente a explorar las características de nuevas proteínas supuestamente involucradas en esos mecanismos.
En cuanto al desarrollo en si del proyecto de investigación, paso a detallar el trabajo realizado hasta la fecha

Experimento 1
-Efecto del cloruro de lirio en combinación con estradiol in vivo.
Pedido, recepción. adaptación y supervisión de los 8-flima1es. En este caso se trabaja con ratonas hembras adultas, de la especie Rattus norvegicus, variedad albina, raza Wistar de 1 mes de vida.
Supervisión del desarrollo de los animales en condiciones establecidas para la manipulación de acuerdo con las directrices de la Unión Europea (86/609/EEC); en consecuencia se procuró recurrir al menor número de animales posibles en cada diseño experimental.
A las cinco semanas, se efectuó ovariectomización de los animales. Con el fin de minimizar el nivel de estrógenos circulante, se realizó una overiectomía bilateral, utilizando halotano como anestesia, previa limpieza de la zona rasurándola y desinfectándola con etanol.
Consecutivamente, seguimiento de la recuperación, y preparación del diseño del tratamiento a llevar a cabo en los animales.
El tratamiento> iniciado a la semana de la recuperación, consistió en inyecciones diarias con 0,5 neqlKg de ClLi durante 8 dias. En cuanto al simultáneo tratamiento con hormonas y dado que el 17-0- estradiol atraviesa sin dificultad la barrera hematoencefálicia. fue administrado por vía intraperitoneal; el compuesto hormonal fue inicialmente disuelto en etanol 70% y luego en aceite de girasol. Con respectos a los respectivos grupos de control fueron tratados exclusivamente con el vehículo.
Tras 24 horas de ambos tratamientos, se sacrificó a los animales a los tiempos indicados según el diseño experimental. Para el proyectado análisis de los tejidos cerebrales por westem blotting e inmunoprecipitación, los animales se anestesiaron con CO2 y se decapitaron. A continuación, se extrajo rápidamente el cerebro se disecaron las zonas de interés y se congelaron mediante nitrógeno liquido o nieve carbónica; hasta su procesamiento serán mantenidos en ultra congelador -80OC.
La etapa actualmente en curso corresponde a la hornogenización de los tejidos, consistente en la siguiente secuencia: determinación del peso del tejido, su mezcla con Tampón de homogenización y posterior trituración en Ultrajas a 2000 rpm durante 25 segundos, todo ello a 4ºC.

Experimento 2
-Interacción del ejercicio y del estrógeno como posibles inductore5 de neurogénesis en un modelo de depresión animal
He participado de manera directa en el diseño experimental, así como en la protoco1arización de cada W1a de sus etapas,
Este complejo estudio está siendo llevado a cabo con ratones C57/BL6 hembras, quienes contaban con 11 semanas al momento del inicio del experimento.
Los animales han sido distribuidos en cinco grupos, según sean tratados con estrógenos o bien con su vehículo, o sometidos a ejercitación y/o natación forzada, siendo este último el modelo ya. establecido por la bibliografía como inductor de estrés. El quinto grupo corresponde a los respectivos controles.
Al igual que en el experimento anterior. y con el fin de disminuir al máximo la concentración en plasma de estrógenos circulante, a las 12 semanas de edad se procedió a la ovariectomización de los animales en forma similar a la ya descripta, aunque recurriéndose en esta ocasión a la anestesia mediante 2,2,2 tribromoetanol, mas adecuado para esta especie animal. A la semana de recuperación; se iniciaron los ejercicios según fuera previsto por el protocolo. Durante 21 días continuados, tanto los grupos de animales sedentarios como los de los corredores fueron dispuestos en los apararos utilizados para esos fines en las salas de comportamiento que el Instituto destina para ello.
En la fase final se procedió al tratamiento, que en este caso consistió en una única inyección de 5-bromo 2- deoxyuridine vía intraperitoneal y a los 30 minutos otra de 17- Oestradiol disuelto en aceite de sésamo vía subcutánea; idéntico procedimiento se empleó para los animales de los grupos control pero recurriendo únicamente al vehículo (aceite de sésamo).
A las 24 y 48 hs posteriores al tratamiento se realizó la prueba de natación forzada para cada animal. Todo el procedimiento fue filmado para su posterior análisis y evaluación estadística. Una vez culminada la etapa de comportamiento y previa anestesia profunda los animales mediante pentobarbital sódico, se procedió a la perfusión de solución salina a través de la aorta ascendente. Inmediatamente se extrajeron tejidos cerebrales. tanto para fijación en parafonnaldehido al 4% con fines de posterior aplicación de técnicas de inmunomarcación, como para congelación (según ya fuera descrito) con fines de ulterior estudio de proteínas. Procedimiento de congelación antes descrito. Los cortes por vibrátomo se efectuaron a 50 M-m de la mitad seleccionada del cerebro para inmunohistoquímica.
El experimento se encuentra en la etapa de procesamiento de los tejidos destinados a la marcación por inmunohistoquímica ya que los iniciales resultados a obtener serán serán orientativos para los posteriores estudios de proteínas.

Maria Cecilia Vanzani

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INFORME FINAL

Madrid,
Marzo 2006

En referencia al informe final que se adjunta, corresponde destacar que los resultados preliminares hallados en el particular caso del “experimento in vivo 1 b”, han suscitado un gran interés por asegurar la continuidad del proyecto, y es así que se seguirá llevando a cabo en el transcurso del presente año en base a mi colaboración desde Buenos Aires y en coordinación con los investigadores del Instituto Cajal que participan en dicho proyecto. En cuanto al “experimento in vivo 1 a”, los datos preliminares hasta ahora obtenidos están siendo elaborados para su oportuna presentación como comunicación científica. Con respecto al “experimento 2 (in vitro)” el procesamiento de alícuotas congeladas que se continuará con la detección de marcadores de stress celular ( HSP 70), dados los alentadores resultados logrados con la TAU-1, a su vez de reconocida vinculación con la enfermedad de Alzheimer.
Se ha hecho entonces evidente que la experiencia que esta beca me ha permitido alcanzar y la posibilidad de profundizar los hallazgos obtenidos en curso del proyecto de investigación emprendido, permiten asegurar la ya iniciada y estrecha colaboración entre mi lugar de trabajo en Buenos Aires y los laboratorios bajo la dirección del Prof Dr L. M. García Segura en el Cajal. Por las expuestas razones, entre otras, cabe expresar mi permanente agradecimiento a todos aquellos que hicieron factible mi pasantía en en el Instituto Cajal, tanto en el país patrocinador como en el anfitrión.
Finalmente, y como ya mencionara en el primer informe, el ambiente cosmopolita del Instituto y del propio laboratorio en que me desempeñé, han fomentado mi relación personal y laboral con otras personas de los mas variados países de la Comunidad Europea y de América. Y es por esa adquirida experiencia que para los futuros becarios, sugeriría como lema del año 2005 a “Dar de sí antes de pensar en si.”

El presente informe detallado de las actividades realizadas se encuentra en estricta continuidad con el precedente y enviado primer informe.

1. Experimentos in vivo

a) Efecto del cloruro de litio en combinación con estradiol
Para el posterior análisis de las proteínas por inmunoprecipitación y westem blotting, el tejido se homogenizó en un tampón de lisis adecuado: 20 mM Tris-HCI pH 7,4, 150 mM NaCl, 10% glicerol, S mM EDTA, y 1% Nonidet P-40 (Roche, Alemania). Además se añadieron inhibidores de proteasas: PMSF, 50 µg/ml; leupeptina, 25 µg/ml; aprotinina, 10 g/m) y un inhibidor de fosfatasas (ortovanadato sódico, 100 nM). Todos los mencionados reactivos procedían de Sigma, St. Louis, MO, Estados Unidos. Cada una de las muestras de tejidos se sumergió en 1 mi del tampón y con ayuda de un motor se homogeneizó en frío. El homogenato se mantuvo durante 30 minutos en hielo y posteriormente se centrifugó a 21.000 g. La concentración de proteínas del sobrenadante fue evaluada utilizando un ensayo de Bradford modificado (BioRad, Alemania).

-Electroforesis y Westem Blotting. Esta técnica permite separar las distintas proteínas de una mezcla compleja (homogenizado de tejido o de un cultivo celular) en función de su peso molecular. Esto se consigue aportando un campo eléctrico que desplaza las proteínas a través de un polímero poroso (gel de acrilamida/bisacrilamida). La electroforesis se realizó siempre en condiciones desnaturalizantes, esto es en presencia de altas concentraciones de detergente y de un agente reductor. Tras su separación
electroforética, las proteínas se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa, donde una vez inmovilizadas, se procedió a su marcado utilizando anticuerpos específicos tales como Receptor de estrógenos alfa ER? Ab-1S Receptor de estrógenos alta ER?, Receptor de estrógenos beta ER?, y Receptor de IGF-IIGF-IR Subunidad p8S de PI3K – ?-Catenina – GSK? Serina 73 Akt fosforilada 4a (pAkt) y Serina 9 -GSK3? fosforilada (pGSK3).

b) Interacción del ejercicio y del estrógeno como posibles inductores de neurogénisis en un modelo de depresión animal.
-Inmunomarcación. Los cortes por vibrátomo se efectuaron a SO µm de la mitad seleccionada del cerebro para inmunohistoquímica, mediante un protocolo estándar de inmunohistoquímica (lHQ) en flotación, según técnicas que posibilitan la localización de los antígenos in situ, permitiendo así el estudio tisular y celular de las proteínas en cortes histológicos de tejido que ha preservado su estructura. Para el caso, el objetivo era la visualización de los marcadores de neurogénesis, en el giro dentado e hilus del hipocampo. Los cortes fueron teñidos posteriormente para su análisis morfométrico con la tinción de Nissl, usando como colorante el azul ~e toluidina

-Análisis morfométrico. Por cada animal se analizaron seis cortes. Se estimó el número de neuronas en el hilus del hipocampo izquierdo con el método del disector óptico (Howard y Reed, 1998; Rossouwet al., 2002), utilizando como disector de altura el grosor del corte (Hatton y von Bartheld, 1999) y un marco de cuenta. El grosor del corte fue estimado con la ayuda de un calibrador digital de grosor (Heidenhain-Metro MT 12/ND221, Traun reut , Alemania) acoplado al microscopio. Se contaron los núcleos teñidos de azul de toluidina que se podían enfocar en la altura del disector, y se restringió el conteo a aquellas células con morfología inequívoca de neurona.

-Análisis de comportamiento. las filmaciones obtenidas del Forced Swim Test (FST) fueron analizadas según el programa y el protocolo debido a tal metodología. (Shearman et al. 2003).

-Electroforesis y Westem Blotting. Se recurrió al mismo protocolo empleado para tejidos, a fin de cuantificar proteínas (ensayo de Bradford), las que fueron posteriormente
analizadas por Western Blotting. Para el caso, la detección de proteínas de interés estuvo referida a Receptor de estrógenos alfa ERa Receptor de estrógenos beta ERI3 Receptor de IGF-I IGF-IR Subunidad p85 de PI3K – . Todos los controles de carga fueron realizados con p8S.

2. Experimento in vitro

Efecto del cloruro de litio en combinación con estradiol en cultivo de células N2a

El litio, tal como los inhibidores farmacológicos de la quinasa GSK30, inhibe la transcripción mediada por el receptor de estrógeno (ER) a en las células N2a. Por tanto, con el fin de profundizar el estudio del efecto de la inhibición de la GSK3 O en la trascripción mediada por el ER en las células N2a, comparamos el efecto del litio combinado con el estradiol, dados los precedentes resultados obtenidos in vivo.

la primera aproximación al problema consistió en elegir un modelo de estudio apropiado. Nos decidimos por las “neas celulares a fin de facilitar las manipulaciones necesarias para estudiar la actividad de los ER. Tras comprobar la expresión de los ER y su funcionalidad en el neuroblastoma N2a {Green, 1977 168 lid}, este nos pareció un buen modelo para llevar a cabo nuestros estudios in vitro. El neuroblastoma N2a (NO CCl131), proviene de la colección americana A TCC), y ha sido originado a partir de un tumor espontáneo en una cepa de ratones albinos. la expansión de la línea celular se realizó en frascos de cultivo de 175 crn3 (BO Biosciences, Madrid, España), utilizando como medio basal de cultivo OMEM, suplementado con F12, antibióticos, antimicóticos y suero de ternera fetal (FCS, 10%). Se efectuaron pasajes a razón de 1:3 y 1:6 para su mantenimiento. El medio fue renovado dos veces por semana. Oportunamente, se utilizó una solución de tripsina (0.25%) y EDTA (1mM) para despegar las células de su sustrato. Todos los componentes que se emplearon en los cultivos provenían de I nvitrogen , GicoBrI, Barcelona, España. Para los subcultivos, se utilizaron distintos tipos de placas (BO Biosciences, Madrid, España).
-Plásmidos. Para evaluar la funcionalidad de los ER a detectar en las células N2a, se recurrió a un plásmido sobre-expresión que permite la expresión de un gen reportero bajo el control de un elemento de respuesta a estrógenos, los que .utilizan una secuencia promotora de origen viral (Citomegalovirus) y actividad constitutiva muyalta1 para así controlar la expresión de la secuencia clonada. la estructura del plásmido que utilizamos corresponde a pTA-ERE-SeAP (Clontech, SD Biosciences, Madrid, España). En algunas de las quinasas que participan en la señalización, evaluamos además el efecto de esas mismas quinasas en la actividad transcripcional de los receptores de estrógenos frente al litio. Resta por utilizar un plásmido reportero con el elemento de respuesta a ácido retinóico (RARE), también conectado al reportero SEAP (Clontech, BO Biosciences, Madrid, España).

– Transfección. Siendo la transfección el proceso mediante el cual se introducen secuencias de AON exógeno en células eucarióticas, recurrimos a ella para la detección de diversas proteínas de interés y la introducción de secuencias reguladoras que controlan la expresión de genes reporteros. Como las secuencias de AON codificante introducidas tienen un máximo en su expresión de alrededor de 48 horas tras la transfección, todos los experimentos fueron realizados aprovechando este máximo de expresión transitoria. De las múltiples técnicas de transfección existentes, elegimos una basada en reactivos lipídicos, los que forman complejos con el AON y permiten su entrada en la célula. Elegimos este método por su alta eficiencia, su reproducibilidad y su baja toxicidad en las células N2a. Utilizamos el reactivo comercial Fugene (Roche, Madrid, España) en las condiciones que estudios de estandarización habían indicado. Utilizamos entonces un plásmido de expresión constitutiva de la proteína fluorescente verde (pEGFP-N1) que permite visualizar las células transfectadas, ajustando así la densidad celular, la cantidad de ADN y la relación entre la cantidad de ADN y el reactivo de transfección óptimas para una eficiente entrada y expresión del AON exógeno.
– Tratamiento. El tratamiento consistió en la determinación de: a} las dosis iniciales; b} el vehículo; y c} las drogas, en distintas combinaciones y a distintos tiempos. Para la evaluación.,de los respectivos efectos, las proteínas de cultivos celulares fueron obtenidas en dos tipos de tampones. Para 10s cultivos primarios se utilizó un tampón más desnaturalizante (62,5 mM Tris-HCI, 2% SOS, 10% sacarosa y 500 OM PMSF). Estos extractos fueron, además, sonicados y desnaturalizados por calentamiento a 95°C. Tras la estimación del contenido de proteínas, se utilizaron 20 Og de cada muestra para el westem blotting. Para las líneas celulares se utilizó el mismo tampón de lisis que fuera empleado para la obtención de proteínas de los tejidos. Se prosiguió con un protocolo idéntico al referido para tejidos, para la cuantificación de proteínas (ensayo de Bradford) y posterior análisis por westem Blotting, para detección de proteínas de interés,

Estadística. Para el análisis estadístico de los datos hemos utilizado el programa informático SPSS. El nivel de significación estadística se estableció siempre en valores de p menores de 0,05. En primer lugar, se procedió a comprobar la homogeneidad de las varianzas, lo que determinaría el tipo de análisis posterior. Cuando las varianzas fueron homogéneas, se utilizó la prueba T de Student para la comparación de datos procedentes de experimentos con únicamente dos grupos y un ANOV A de una vía para comparaciones múltiples. Cuando las pruebas de comparaciones múltiples indicaron la existencia de diferencias significativas, estas se detallaron entre pares de datos mediante análisis post- hoc apropiados. En los experimentos, se utilizaron los análisis de Bonferroni, Tukey y DMS.

Muchas gracias.
María Cecilia Vanzani.

MINISTERIO DE EDUCACIÓN y CIENCIA
Prof. Luis M. García-Segura Instituto Cajal, CSIC Avenida Doctor Arce 37 28002 Madrid, España

Madrid, 31 de Marzo de 2006

A QUIEN CORRESPONDA

Luis Miguel García Segura, Profesor de Investigación del Instituto Cajal del Consejo Superior de Investigaciones Científicas.

INFORMA: Que la médica MARÍA CECILIA VANZANI ha realizado una estancia de investigación en el Instituto Cajal desde el 2 de Julio de 2005 al 31 de Marzo de 2006. Durante este tiempo ha realizado estudios sobre los efectos de la hormona ovárica estradiol en modelos animales de depresión y en la regulación hormonal del efecto del cloruro de litio en cerebro. El cloruro de litio es utilizado en el tratamiento del trastorno bipolar y sus mecanismos de acción en cerebro incluyen la regulación de la actividad de la enzima glucógeno sintasa kinasa 3 (GSK3). Con estos estudios ha obtenido resultados altamente novedosos y muy interesantes que indican que el estradiol interactúa con el cloruro de litio en la regulación de la actividad enzimática de la GSK3 y que las enzimas fosfatasas pueden estar implicada en este efecto. Por otra parte, María Cecilia Vanzani ha realizado un estudio sobre la interacción del estradiol y el ejercicio sobre la neurogénesis en el cerebro adulto y el comportamiento depresivo en ratones. Los resultados obtenidos han abierto una nueva y prometedora línea de investigación. En resumen, la labor realizada por María Cecilia durante su estancia en el Instituto Cajal ha sido plenamente satisfactoria.

Ampliación informe final.
-Algunos de los logros académicos quedan descriptos en la importante continuidad que se le darán a los proyectos de investigación iniciados en el Instituto Cajal y referidos en el anterior informe final. El reconocimiento del aporte que con mi trabajo contribuyera al laboratorio en donde desempeñé tal labor y que con gran generosidad describiera en Dr. García Segura en la carta que enviara adjunta al informe mencionado, lo cual en sí mismo considero una distinción.
Ninguna de las actividades concernientes al trabajo de investigación podrían haberse realizado de no contar con la beca otorgada.
El desempeño responsable, eficiente y en gran medida exitoso, logrado con el esfuerzo cotidiano, han sido mi modo de agradecimiento a patrocinadores y anfitriones.
-El ámbito cosmopolita del lugar en el que desarrollaba mi trabajo me ha permitido el contacto con profesionales de diversos países a mas del anfitrión, como Japón, Dinamarca, Portugal, EE.UU, México, y el enriquecimiento de un fecundo intercambio cultural.
Considerando que la Paz se promueve respetando la conciencia de cada hombre, escuchando atentamente a los conflictos locales que actualmente afectan al país anfitrión, pude comprender el alcance que tal conflicto significa para una España, que sufre una división pero parecería no puede evitar.
El participar de diversos eventos tanto académicos como de neto corte social, desde una perspectiva abierta y solidaria ofrecía mi colaboración desinteresada.
-En lo que podría ser un aporte constructivo una situación determinada, es un ejemplo que en la Parroquia de Santa Gemma muy cercana al Instituto Cajal, he prestado mi colaboración en el reparto de alimentos y donativos de ropa para inmigrantes indigentes.
-Si bien se recoge pasado un tiempo de la siembra, dada la repercusión de mi estadía, manifestada en el afecto y generosidad tanto de mis compañeros de trabajo, personas con las que he convivido en lo cotidiano, mi coordinador de beca en el país anfitrión, los miembros de la Fundación, me permiten entrever lo positivo de mi presencia en tales ámbitos, contribuyendo favorablemente con algún aporte de ideas o sugerencias felizmente aceptadas. Por ejemplo intentar una mayor compresión entre los miembros de la familia en donde he recibido, o ser un nexo entre los compañeros de trabajo de diversas creencias y culturales.
-No podría aseverar que alguna situación en particular haya cambiado el curso de mi vida, pero si el caudal de experiencias adquiridas ha enriquecido e incrementado las posibilidades de opciones frente a futuras decisiones.
-Tanto Rotary, como el programa de Beca de Buena Voluntad, me han posibilitado la pasantía de investigación, conocer gente y lugares, nuevas oportunidades no solo de intercambiar ideas sino de promover actitudes de compañerismo y establecer lazos efectivos y duraderos.
La asistencia permanente y cercanía de patrocinadores y anfitriones me han dado confianza en el desempeño de las tareas realizadas. El contar con apoyo en un país extranjero es condición necesaria para un exitoso desempeño El acogedor recibimiento en el Club anfitrión, me mostraron que Rotary funciona como una gran familia en donde cada miembro se interesa por el otro y aún más allá de las fronteras del propio Club. .
-Insisto en lo previamente sugerido en al informe precedente, que la mejor recomendación para futuros becarios es 10 ilustrado con el lema del año 2005 “Dar de si, antes de pensar en. si”.
-En cuanto a la información acerca de la vida del becario en el exterior depende la capacidad de adaptación a los distintos ámbitos en donde deberá desarrollar su actividad, sugeriría una disposición generosa hacia lo distinto, previo, a través de la información a su alcance de prepararse a los nuevos desafíos y siempre recordando que su actuar representa no solo a sí mismo sino a todos aquellos que hicieron posible la nueva experiencia.
-Quedo en total y generosa disposición en cuanto a la orientación de futuros becarios, y presumo la continuidad del contacto con Rotary a través de mi Club patrocinador en Buenos Aires.

Muchas gracias.
María Cecilia Vanzani.